Полимеразная цепная реакция (ПЦР) на инфекции, передающееся половым путем (ИППП)

Главная / Услуги / Полимеразная цепная реакция (ПЦР) на инфекции, передающееся половым путем (ИППП)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) на инфекции, передающиеся половым путём (ИППП) — один из наиболее точных и быстрых методов диагностики инфекционных заболеваний. Свое применение метод нашел в множестве сфер биологической и медицинской практики (урологии, гинекологии, неонатологии, службах переливания крови).

ПЦР была открыта в 1986 году американским биохимиком Кэри Маллисом. За это открытие ученый был удостоен Нобелевской премии по химии в 1993 году.

Более 30 видов бактерий, вирусов и простейших могут передаваться в результате сексуального контакта (вагинальный, оральный и анальный секс) и объединяются в одну группу под названием “инфекции, передающиеся половым путем (ИППП)”. Самыми распространенными из этих заболеваний в настоящее время являются:

  • сифилис;
  • гонорея;
  • хламидиоз;
  • трихомониаз;
  • вирус простого герпеса;
  • вирус папилломы человека (ВПЧ);
  • вирус иммунодефицита человека (ВИЧ);
  • вирус гепатита В.

Некоторые инфекции имеют и другие пути передачи, например, через кровь, а также от матери ребенку.

Симптомы инфекций, передающихся половым путем (ИППП)

Чаще всего пациентов могут беспокоить вагинальные выделения или выделения из уретры (мочеиспускательный канал), чувство жжения во время мочеиспускания, язвы в области половых органов и боли в животе.

Нередко ИППП могут протекать бессимптомно, что усложняет своевременную диагностику и лечение заболеваний, приводит к появлению осложнений, а также способствует продолжению распространения болезней.

Как результат бессимптомного течения инфекции или не обращения к специалистам могут быть такие серьезные последствия:

  • передача заболевания от матери к ребёнку, что, в свою очередь, может привести к мертворождению, недоношенности и недостаточному весу новорожденного, сепсису, пневмонии, конъюнктивиту и врожденным аномалиям развития;
  • бесплодие;
  • около 14 штаммов ВПЧ являются онкогенными и в 70% случаев рака шейки матки его причиной являются ВПЧ типа 16 и 18.

Следует помнить, что многие ИППП (сифилис, хламидиоз, трихомониаз, гонорея) полностью излечимы. Течение других заболеваний, причиной которых являются вирусные агенты, может быть значительно облегчено с помощью терапии и сохранено высокое качество жизни.

Суть метода полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Метод основывается на многократном увеличении числа копий специфического участка ДНК (направленная амплификация ДНК) или РНК. Именно за счет многократного копирования уровень специфической нуклеотидной последовательности в пробе вырастает в 106-108 раз, что и обеспечивает высокий уровень чувствительности метода. Для амплификации нужен фермент ДНК-полимераза, полученный с термофильных бактерий и обладающий стойкостью к нагреванию, праймеры (молекулы, которые служат начальным пунктом для удвоения нуклеиновых кислот), нуклеотиды (структурные единицы ДНК), буферный раствор и прибор, обеспечивающий нужную температуру для реакции.

Сначала двухцепочную ДНК нагревают до 94-96°С, что приводит к разделению цепей (денатурации). Дальше температуру снижают и праймеры начинают связываться с расщепленными цепями ДНК. И после этого ДНК-полимераза начинает удвоение, используя праймер как затравку.

Вирусы могут иметь генетический материал, представленный не ДНК, а РНК. В таких случаях для диагностики используют ПЦР с обратной транскрипцией. Метод отличается тем, что перед стандартными реакциями молекулу РНК с помощью обратной транскриптазы превращают в комплементарную ДНК.

Этапы диагностики методом ПЦР

Диагностика методом ПЦР проводится в несколько этапов:

  1. Забор материала.
  2. Транспортировка и хранение материала: при комнатной температуре до 2-х часов, в холодильнике при температуре 2-8°С — до 24 часов.
  3. Выделение ДНК из материала.
  4. Амплификация ДНК: проводится с помощью амплификационных смесей в термостате. Длится около 2-3 часов.
  5. Интерпретация результатов с помощью электрофореза в присутствии бромистого этидия: при просмотре в ультрафиолетовом свете наличие светящихся участков свидетельствует о положительном результате.

Также возможно проведение количественной ПЦР. Проанализировав данные этой реакции, врач может оценить степень активности процесса и назначить нужное лечение.

Преимущества и недостатки метода полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Преимуществами метода ПЦР являются:

  • Высокая чувствительность — тест-системы позволяют обнаружить патогенные для человека бактерии и вирусы даже тогда, когда другими методами (серологическими, бактериологическими, микроскопическими) их выявление невозможно. Чувствительность амплификационных систем составляет 10-103 клеток в пробе, тогда как для других колеблется в пределах 106.
  • Высокая специфичность — в изучаемом материале выявляется уникальная, характерная только для данного вида возбудителя часть ДНК. Таким образом удается избежать проблем с перекрестно-реагирующими антигенами.
  • Быстрота получения результатов.
  • Использование разного материала (кровь, моча, мазок, смыв, соскоб и т.д.).

Количество недостатков ПЦР столь мало, что их наличие не влияет на эффективность метода. К ним можно отнести:

  • Амплификация ДНК погибшего микроорганизма. Эту особенность метода следует учитывать при контроле лечения. Проводить ПЦР следует через 1-2 месяца после окончания терапии, в течение которых происходит полная элиминация микроорганизмов.
  • Изменчивость и мутация микроорганизмов.

С учетом преимуществ, на сегодня диагностика с помощью ПЦР становится все более незаменимой, точной и быстрой.